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探討病毒去活性後的血小板裂解物和血小板微粒在再生醫學和神經保護的效用

為了解決cardigan definition的問題，作者周明莉 這樣論述：

近年來，富含生長因子(GF)的血小板裂解液(PL)被認為是一有力的臨床級添加物，將其添加至細胞培養基中可使間葉幹細胞(MSC)進行擴增，且有促進癒合的作用，故也可視為一治療產品。然而在再生醫學中，此類血液製品有必要被確保其安全性以及最佳品質，因此需考慮如血小板衍生微粒(PMP)以及病原性病毒的傳染等的影響。PMP表面雙層脂質膜上的磷脂絲胺酸，被認為會引起血栓和發炎等副作用，需利用奈米過濾去除血液中存在的微粒；而病原性病毒的傳染，包括C型肝炎病毒，會影響血液製品的安全性，需透過化學劑(S/D)、熱處理或奈米過濾等專門消毒方法去除病毒的活性。論文首先探討是否能透過消毒技術來提高再生醫療中血液製品

的安全性：(a) 利用75奈米過濾去除PMP; (b) 透過S/D或56°C加熱處理滅活HCV或透過奈米過濾去除HCV。其次探討是否能開發和改進臨床級血小板沉澱裂解液(PPL)，使之能應用於神經再生。我們假設客製化的PPL富含多種神經滋養生長因子，且透過熱處理使其不含血漿蛋白（特別是纖維蛋白原），如此一來，此客製化的PPL能提升多巴胺神經元的神經保護作用，可作為神經退化性疾病的新治療策略。研究結果如下：第一，透過消毒技術來提高再生醫療中血液製品的安全性：(a)透過特殊生物檢測方法可發現，經由75奈米過濾後， PMP 被確切移除，且避免了體外PMP相關的凝血酶的產生，但依舊保留血漿蛋白、脂蛋白、

凝血因子含量和球蛋白凝血活性。(b) 根據訊號強度分析指出，將具有冷光標記感染性細胞衍生的HCV (HCVcc)顆粒加入血漿中，使血漿受到感染後，再將該HCVcc 在31°C的作用環境下透過S/D處理，30分鐘內即可發現其病毒感染力完全喪失，且偵測不到病毒蛋白NS5A。綜合上述結論可知，透過S/D處理和奈米過濾技術可有效降低血栓形成機率和HCV的傳染風險，進而提高輸血之安全性。第二，開發和改進臨床級PPL，使之能應用於神經再生醫學：(a)根據ELISA分析和蛋白質組學研究顯示，經由56°C熱處理，30分鐘後的蛋白質組成會被修飾且更具有神經保護活性。故熱處理能改善神經保護活性，若進一步使用S/D

和奈米過濾等方法將有助於HCV失活。(b)在帕金森氏症模型的離體實驗（以MPP+神經毒素刺激LUHMES細胞），和動物實驗（給予小鼠MPTP神經毒素）中，PPL皆被證實有顯著的神經保護作用。(c)在黑質緻密物中酪胺酸羥化酶(TH)蛋白表現的研究顯示，透過鼻腔給予 (i.n.) PPL的方式可作為未來神經退行性疾病的另一種治療策略。(d)根據LUHMES研究顯示，訊息轉導途徑的特異性抑制會調控PPL的神經保護作用。(e)先前研究指出，神經過度發炎最終亦會導致神經退化性疾病，故我們利用內毒素LPS刺激BV2細胞誘導其產生發炎介質（例如iNOS, COX-2），證實PPL給予並不會加重其發炎反應，且

能抑制COX-2蛋白的表現。此外，檢測發現PPL含有1 × 10 12 MP/mL，其平均大小為160 nm。綜觀上述可知，對於細胞治療和再生醫學，我們的研究提供了製備安全的客製化血小板裂解物技術的可行性，特別是可作為中樞神經系統的神經保護製劑。