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國立中興大學 生命科學系所 鄭旭辰所指導 蓋鈺宸的 探討雞毛囊中生殖激素的標的基因 (2020),提出Bowtie Pink關鍵因素是什麼,來自於性激素受體、性激素受體調控序列、羽毛、性別兩型性、報導基因活性分析。

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接下來讓我們看這些論文和書籍都說些什麼吧:

除了Bowtie Pink,大家也想知道這些:

探討雞毛囊中生殖激素的標的基因

為了解決Bowtie Pink的問題,作者蓋鈺宸 這樣論述:

家雞 (gallus gallus domesticus)為台灣最常見之動物,同時也是分布最廣、家禽中數量最多的動物。因被人類長期馴化,使牠多樣的性狀累積,讓家雞成為遺傳學研究的重要模式動物。其雌雄個體具有性別兩型性,也就是在外觀、體型上有差異,其中也以羽毛最為顯眼,羽毛不只具有裝飾作用,同時也是生物表皮系統重要之模型。就外觀而言,雄性的羽毛成尖頭並且細長,也會因其品種而有不同的圖騰;而雌性的羽毛則呈圓頭也較短,顏色也較單一狀。在過去有許多研究關於性別兩型性之分子機制,前人研究中也以家雞作為材料,並利用次世代定序、生物資訊分析,以及Assay for Transposase-Accessib

le Chromatin using sequencing (ATACseq)之方法,找出可能影響性別兩型性的候選基因,但仍未有關鍵性之證據。 由於在前人研究中,利用生物資訊分析之方式,預測出雌激素調控序列 (estrogen response elements, EREs)以及雄激素調控序列(androgen response elements, AREs)所在位置,但在ATACseq分析中卻發現,不只有預測到ERE的位置有開放性差異-Wnt11,沒有預測到的位置也具有開放性之差異-OCA2,因此我們推測其中是否有非典型ERE參與其中。而有預測到的位置卻沒有開放性之差異-KITLG,推

測為此片段有功能,但卻不是於In vivo狀態下之首選調控位點。在本試驗中,我們將其基因分組,設計序列引子,做報導基因 (Reporter assay)之活性分析;也將ATACseq做進一步分析成in silico footprinting,並與RNAseq的結果做比對,從中挑選出其基因具有性激素調控序列ERE- PTN、PTX3以及ARE- ABCA1、NREP,也將其序列設計引子,做報導基因測試 (Reporter assay)之活性分析。 結果顯示,在預測到ERE且ATACseq有差異的組別為有效片段;未預測到ERE但ATACseq有差異也為有效片段;有預測到ERE,但ATACse

q卻未有差異的片段luciferase量也有提升,雖然在過高濃度的雌激素作用下,會導致細胞自主性調控。而利用in silico footprinting以及RNAseq所挑選出具有ERE的基因也為有效片段,但此片段對於雌激素相對較於敏感;以及ARE影響的基因,結果顯示由於閹割公雞血清內少量的雄性激素,而導致ARE並未受到雄性激素之調控,然而使用雄性激素受體抑制劑,可以有效降低其活性反應,藉此證明此片段為有效片段。由於前人研究顯示雌激素受體,對於羽毛的性別兩型性之重要性,因此於本試驗中也使用了雌激素受體抗體,了解雌激素受體在羽毛內的分布狀況以及狀態。以上實驗我們得知了影響羽毛兩型性的關鍵基因,也

從先前實驗得知雌激素受體的重要性。因此我們也設計了CRISPR/Cas9雌激素受體的質體,可以藉由基因編輯的方式,knockout雌激素受體,來知道若將雌激素受體敲除,會對於這些基因以及羽毛型態有何影響,為未來的研究提供下一步之開端。